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怎么選擇得心應(yīng)手的Elisa試劑盒
Elisa試劑盒在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)相當(dāng)普及,絕大多數(shù)ELISA試劑盒都是用于檢測未知樣本中抗原的濃度。用試劑盒當(dāng)然比自己慢慢摸條件快得多,ELISA試劑盒不僅可以讓實(shí)驗(yàn)更便利,往往還更加?,F(xiàn)在市面上的ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進(jìn)口,數(shù)量繁多令人目不暇接,怎樣才能選出zui適用的產(chǎn)品呢,首先當(dāng)然得根據(jù)我們所要檢測的分子進(jìn)行檢測,除此以外也還有一些需要加以考量的因素。
*步、明確檢測何種蛋白。
第二步、明確編碼該蛋白的基因與其它哪些物種同源性。
第三步、尋找檢測這些物種蛋白的試劑盒。
第四步、咨詢商家ELISA是試劑盒使用的抗體類型:多抗還是單抗,單抗是針對什么抗原決定簇的。
第五步、做出自己的判斷該買哪個試劑盒。
從Elisa試劑盒的靈敏度、特異性、精密度、準(zhǔn)確度、簡便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評價(jià):
靈敏度:①為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力;②為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力;
特異性:常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng),使測定結(jié)果升高,可能導(dǎo)致假陽性,所以交叉反應(yīng)是評價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo);
精密度:ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%,其值應(yīng)小于15%;定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍;
準(zhǔn)確度:通過添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評價(jià);
簡便性:指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下,實(shí)驗(yàn)和測定步驟越少越好,在定性實(shí)驗(yàn)中結(jié)果判斷簡單明了,定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡單;
安全性:指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性;
經(jīng)濟(jì)性:試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)?;蚣夹g(shù)進(jìn)步降低成本,而市場價(jià)格比較合理;
試劑評價(jià):需要有的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型、抗體類型、交叉反應(yīng)、檢測方式來選擇Elisa試劑盒:
通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn),雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間,這種方法既靈敏又有效,受到了許多研究者的青睞。不過有時候雙抗夾心法并不是*選擇,例如有時候抗原特別小讓兩個大抗體難以附著,又或者抗體只有一個抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下,競爭性ELISA就更為適用,這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無標(biāo)記的抗原進(jìn)行競爭,以結(jié)合捕獲抗體。